GBT 34745-2017 猪圆环病毒2型 病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法

常见问题解答（FAQ）

问：什么是猪圆环病毒2型（PCV2）？

猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus Type 2，简称PCV2）是引起猪圆环病毒病的主要病原体之一，可导致仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）等疾病，对养猪业造成严重经济损失。

问：什么是SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法？

SYBR Green I实时荧光定量PCR是一种基于荧光染料SYBR Green I的分子生物学技术，用于检测特定DNA序列的存在与含量。其原理是SYBR Green I能够特异性结合双链DNA并发出荧光信号，通过实时监测荧光强度的变化来实现定量分析。

问：GB/T 34745-2017标准的核心内容是什么？

GB/T 34745-2017是中国国家标准化管理委员会发布的关于猪圆环病毒2型病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的标准文件。该标准规定了检测的基本原则、试剂与设备要求、样品采集与处理流程、实验操作步骤及结果分析方法，为实验室提供了规范化的检测指南。

问：为什么选择SYBR Green I作为荧光探针？

• SYBR Green I具有较高的灵敏度和特异性，能够有效检测目标DNA序列。
• 成本低廉，无需合成特异性探针，降低了实验成本。
• 操作简便，适用于大规模样本筛查。

问：如何确保SYBR Green I实时荧光定量PCR检测结果的准确性？

• 严格遵循GB/T 34745-2017标准中的操作规程。
• 设置阳性对照和阴性对照以验证实验的有效性。
• 采用内参基因进行标准化处理，减少样本间差异的影响。
• 定期校准仪器并进行性能验证。

问：PCR检测中假阳性和假阴性的原因有哪些？

• 假阳性：污染（如环境或试剂污染）、引物设计不合理、非特异性扩增。
• 假阴性：样品保存不当导致核酸降解、抑制剂干扰、引物或探针浓度不足。

问：在样品采集过程中需要注意哪些事项？

• 样品应来源于健康状况异常的猪只，如出现PMWS相关症状。
• 采样部位包括血液、组织（如淋巴结、肺脏等），需无菌操作。
• 样品应在低温条件下保存和运输，避免核酸降解。

问：GB/T 34745-2017标准是否适用于所有类型的猪群？

该标准主要适用于规模化养殖场的猪群检测，但也可根据实际情况扩展至其他类型猪群。对于特殊环境下的检测需求，建议结合具体情况进行调整。

问：如何判断检测结果是否阳性？

• 若Ct值小于阈值且荧光曲线呈典型S形，则判定为阳性。
• 若Ct值大于阈值或无明显荧光信号，则判定为阴性。

问：PCR检测结果阳性是否意味着猪只感染了PCV2？

检测结果阳性表明猪只体内存在PCV2病毒DNA，但并不一定表示临床发病。需要结合临床症状和其他检测手段综合判断。